程序升溫是指色譜柱的溫度按設(shè)置的程序連續(xù)地隨時(shí)間線性或非線性逐漸升高,以使低沸點(diǎn)組分和高沸點(diǎn)組分在色譜柱中都有適宜的保留、色譜峰分布均勻且峰形對(duì)稱。各組分的保留值可用色譜峰高處的相應(yīng)溫度即保留溫度表示。
程序降溫儀溫度的準(zhǔn)確性可能會(huì)對(duì)PCR的成敗與否起決定性作用。加熱模塊上孔與孔之間的溫度一致性對(duì)于獲取可靠而可重復(fù)的PCR結(jié)果也是至關(guān)重要的。確保熱準(zhǔn)確性的一種方法就是經(jīng)常使用溫度驗(yàn)證試劑盒進(jìn)行檢測(cè),并根據(jù)需要由接受過(guò)培訓(xùn)的專業(yè)人士進(jìn)行重新校準(zhǔn)。溫度驗(yàn)證檢測(cè)通??捎糜冢涸诘葴啬J较孪鄬?duì)于設(shè)定溫度的孔間準(zhǔn)確性;在溫度轉(zhuǎn)換后相對(duì)于設(shè)定溫度的孔間準(zhǔn)確性;熱蓋溫度的準(zhǔn)確性。
程序降溫儀在樣品凍存過(guò)程中,降溫速率是影響細(xì)胞復(fù)蘇活性的關(guān)鍵因素:過(guò)快/過(guò)慢都會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷以致影響復(fù)蘇活性。降溫速度過(guò)快時(shí),細(xì)胞內(nèi)的水迅速結(jié)晶,冰晶會(huì)對(duì)細(xì)胞造成內(nèi)部損傷;如果降溫速度過(guò)慢,細(xì)胞外的水先結(jié)冰,會(huì)在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生滲透壓,會(huì)造成細(xì)胞脫水,降低細(xì)胞復(fù)蘇率。但這些問(wèn)題,可對(duì)降溫速率的“精細(xì)控制”輕松解決——降溫的不同階段,采用不同的降溫速率,可有效減少細(xì)胞損傷,提高復(fù)蘇率。一般為“先慢凍,后快凍”。
程序降溫儀工作原理是:通過(guò)微處理器控制系統(tǒng)和電磁閥,控制噴入腔體中的液氮量來(lái)準(zhǔn)確控制降溫速率。其優(yōu)點(diǎn)是:控溫準(zhǔn)確,受外界環(huán)境影響小。尤其是處理大體積樣本時(shí),快速噴入的大量液氮更易帶走樣本中的潛熱,從而快速降溫,保證更好的樣本復(fù)蘇活性。